PAI-1基因啟動子區4G/5G基因多態性與復發性流產的關聯性研究
【摘要】目的探討纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因啟動子區-6754G/5G基因多態性與不明原因反復自然流產的關系。方法對50例復發性流產（研究組）及50例正常對照婦女（對照組），用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)技術，測定PAI-1基因啟動子區-675處4G/5G基因及基因型。結果兩組間PAI-1基因型分布存在差異，研究組中4G/4G基因型和4G基因明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論PAI-1基因啟動子區4G/5G基因多態性與反復自然流產之間存在相關性，且4G/4G純合基因型是導致復發性流產的易感基因型，臨床檢測PAI-1基因啟動子區4G/5G基因多態性可幫助明確流產原因，早期治療，提高妊娠成功率。
【關鍵詞】復發性流產纖溶酶原激活物抑制物多態性
復發性流產(RSA)是指與同一伴侶連續發生2次或2次以上的自然流產，其發病率為1%[1]。發病原因涉及多個學科，婦產科、遺傳科、免疫學、內分泌學等，至今仍有30-40%的復發性流產原因不明[2]。纖溶酶原激活物抑制物-1是纖溶系統的主要生理抑制劑，其水平升高可導致纖溶活性降低，促使血栓形成，是血栓性疾病的獨立危險因素之一。有研究發現妊娠合并癥婦女中的PAI-1水平明顯高于正常妊娠婦女，且其基因型存在多態性，為探討纖溶酶原激活物抑制物-1基因啟動子區4G/5G基因多態性與不明原因復發性流產之間的關系，我們做了如下研究，現將結果報道如下。
1資料與方法
1.1研究對象選擇2010年7月-2011年7月來濰坊市人民醫院就診的重復流產且現已妊娠患者50例（研究組），年齡在23-40歲之間，平均為29.1歲，流產次數在2-9次之間，其中流產2次21例，流產≥3次29例，流產時間在孕38天-3個月不等，平均為69天。研究組患者經篩查排除生殖器畸形、感染、宮頸機能不全、卵巢功能障礙、內分泌異常、免疫相關因素異常、母兒血型不合等。
選取同期門診就診的正常妊娠婦女50例作為對照組，既往無流產史、胚胎停育史、胎兒生長受限及死胎史等，B超檢查確定為早孕，查體為健康婦女且妊娠結局良好。兩組患者孕前及孕后均未給予藥物治療，排除心、腦血管疾病、無高血壓、糖尿病等病史，年齡、體重指數差異無統計學意義。
1.2方法標本采集：抽取患者空腹肘靜脈血4ml，其中2ml注入抗凝EP管中，-20℃冰箱保存備用；其余2ml注入1:9枸椽酸鈉抗凝管中，即刻(均在30min內)3000轉(rpm)離心10min，收集上清液即血漿加入到EP管中，-80℃冰箱保存備用。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)技術，即經PCR擴增→限制性核酸內切酶消化→電泳→基因型讀取，檢測到3種基因型，4G/4G、4G/5G、5G/5G。
1.3統計學方法采用SPSS16.0統計軟件處理，數據采用x2檢驗分析。
2結果
4G/4G、5G/5G、4G/5G三種基因型在研究組與對照組中的分布及4G、5G等位基因的分布采用行×列表資料的x2檢驗，對各種基因型頻率和基因頻率在各組中的構成比進行分析，其結果P均<0.05，三種基因型和兩種等位基因在兩組中的構成比之間差異具有統計學意義，說明4G/4G、5G/5G、4G/5G三種基因型與復發性流產之間存在一定的相關性；采用四格表的?2檢驗分析4G、5G基因的分布，結果P<0.05，說明4G基因在研究組的發病率明顯高于5G基因。3討論
自然流產是妊娠期常見的并發癥之一，其發病原因復雜，目前比較明確的原因有染色體的異常、抗磷脂抗體導致的流產、宮內感染、子宮畸形等，大部分妊娠丟失的原因仍無法解釋，處于探索中。近年來易栓癥的概念備受關注，是指由于遺傳性缺陷和（或）獲得性缺陷而使妊娠期容易發生血栓栓塞的狀態，包括遺傳性和獲得性，這種血栓前狀態不一定發生血栓性疾病，但可選擇性影響子宮胎盤循環而導致胎盤的微血栓形成，胎盤循環障礙，妊娠本身是一種獲得性的高凝狀態，主要表現為生理性抗凝物質減少，促凝活性增加，纖溶活性降低，從而引發妊娠合并癥的發生。
PAI-1是Brakman和Astrup于1963年首先在孕婦血中發現，是由379個氨基酸殘基組成，分子量約為50ku的單鏈糖蛋白。妊娠后,胎盤與子宮肌層也可生成PAI-1。PAI-1是游離型單鏈t-PA快速的唯一抑制物,也是游離型雙鏈t-PA的抑制劑。其作用機制是二者先形成可逆性的不穩定復合物，后演變成穩固的復合物，從而抑制纖溶酶的活性。
PAI-1基因啟動子區4G/5G多態性指的是，在轉錄起始上游-675bp(5′端啟動子區)處存在一個G的插入或缺乏，142bp是PAI-1基因的PCR產物，經Bsll酶切消化后將會出現不同的特異片段，產生3種基因型，即4G/4G型、5G/5G型、4G/5G型。Ericksson等研究證明，轉錄起始因子位點在4G、5G等位基因均存在，5G基因與抑制蛋白結合后，覆蓋了阻遏蛋白與其相結合的位點，空間結構的改變后干擾了PAI-1轉錄水平，4G等位基因沒有轉錄抑制抑制位點，4G基因轉錄水平較5G基因高6倍。本研究表明PAI-1基因啟動子區基因多態性與復發性流產之間存在相關性，4G基因發病率高于5G基因，表明4G基因與5G基因相比，其與復發性流產的關系更為密切。在臨床工作中，檢測PAI-1基因分型有助于明確流產原因，早期治療，提高妊娠成功率。
參考文獻
[1]曹澤毅，主編．中華婦產科學．第2版．北京：人民衛生出版社，2005，98．
[2]EvelyneRey，SuanRKahn，etal.TheLancet，2003;361:901-908
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