硅霜微生物限度檢查方法學驗證
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【摘要】目的 驗證硅霜微生物限度檢查方法的專屬性和有效性。
方法采用直接接種法和培養基稀釋法對硅霜進行驗證試驗，并測算菌回收率。結果 硅霜以直接接種法檢查，白色念珠菌、黑曲霉菌的菌回收率>70%，采用培養基稀釋法后金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的菌回收率>70%。結論 硅霜可以用直接接種法進行控制菌、霉菌及酵母菌總數檢查，以培養基稀釋法測定細菌總數。
【關鍵詞】硅霜;微生物;限度檢查;驗證
硅霜用于治療皸裂、皮炎，并能防止銀宵病治愈后復發。主要是護膚防裂。為保證藥品質量，按照中國藥典2005版[1]的要求，對其微生物限度檢查方法進行驗證，如下。
1實驗材料
1.1培養基:培養基均購自中國藥品生物制品檢定所。
1.2菌種:大腸埃希菌(CMCCB44102)第2代，枯草芽孢桿菌(CMCCB63501)第2代，金黃色葡萄球菌(CMCCB26003)第2代，白色念珠菌(CMCCF98001)第2代，黑曲霉菌(CMCCF98003)第2代
1.3稀釋液:pH=7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。
1.4樣品:硅霜(201006022010060320100604 牡丹江市皮膚病防治研究所)
2方 法
2.1直接接種法供試液制備:取供試品10g三份，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠的容器中，充分振搖使供試品溶解，然后加入40℃～45℃的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖5～10分鐘，萃取，靜置，使油水明顯分層，取其水層作為1：10的供試液，取2mL分別加入置2個平皿中。
2.2直接接種法菌液制備:取1 ∶ 10 供試液2mL，分別加入置2 個平皿中，再分別加入大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100 個菌/mL 的菌液1mL，作為加陽性菌供試液樣。每種菌制備2 份。
2.3培養基稀釋法供試液的制備:將1∶10供試品溶液1mL，分別注入10個平皿中，每個0.1mL，10個為一組，共兩組。
2.4培養基稀釋法加陽性菌供試液的制備:將1∶10 供試品溶液1mL，分別注入10 個平皿中，每個0.1mL，10 個為一組，再分別加入大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100 個菌/mL 的菌液1mL，每種菌株兩組。
2.5操作步驟
2.5.1直接接種法:取1∶10供試液2mL注入2個平皿中，分別加入大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100個菌/mL 的菌液1mL，作為加陽性菌供試液樣。每個菌制備2個平皿。
2.5.2培養基稀釋法:將1∶10供試液2mL，分別注入20個平皿，再分別加入大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100個菌/mL的菌液1mL，每組10個平皿，每個菌株兩組。分別加入已溶化保溫至45℃營養瓊脂培養基，玫瑰紅鈉瓊脂培養基15mL。每1mL供試品溶液所注的平皿中生長的菌落之和為1mL，計算每1mL供試品溶液的平均菌落數，按平皿法計數規則報告菌落數。
2.5.3大腸埃希菌檢查:取1 ∶ 10 供試品溶液10mL 接種于膽鹽乳糖培養基中，培養24h，取上述培養物0.2mL，接種至含5mL MUG 培養基的試管內，培養，于5、24h 在365nm 紫外線觀察，同時用未接種的MUG 培養作本底對照。管內培養物呈現熒光，為MUG 陽性;不呈現熒光，為MUG 陰性。
2.6培養:各平皿培養基凝固后，細菌檢查平皿置30～35℃培養箱48h，霉菌檢查平皿置23～28℃培養箱72h。
2.7樣品微生物限度測定:取供試品10mL，加pH=7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液90mL，混勻，分別按常規法和培養基稀釋法各3份進行操作。
3結 果
硅霜以常規方法檢查，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念球菌、黑曲霉各菌的平均回收率分別為60.5%、44.3%、67.4%、95.4%、98.0%。該樣品對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的檢出均有影響，而對白色念球菌、黑曲霉的加樣回收率均高于70%，故認為常規法測定霉菌和酵母菌總數是符合中國藥典2005年版的要求的;采用培養基稀釋法金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌各菌的平均回收率分別為86.2%、95.6%、88.8%，均高于70%，故認為培養基稀釋法測定細菌總數是符合中國藥典2005版的要求的。
控制菌檢查硅霜無明顯的影響，故控制菌采用常規法進行檢驗。
4結 論
硅霜可以使用常規法即直接接種法進行控制菌、霉菌及酵母菌總數檢查，以培養基稀釋法測定細菌總數檢查。
參考文獻
[1] 中國藥典2005年版二部[S].2005.附錄93-101.
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